Техника приготовления демонстрационных препаратов
В настоящее время школы по разным причинам не имеют возможности приобретать влажные демонстрационные препараты для учебных целей.
В нашей школе ученики старших классов помогают в изготовлении влажных препаратов, таких например, как мускульный и железистый желудки водоплавающих птиц; жабры, плавательный пузырь и кишечник рыб; головной мозг овцы и т.д. Для приготовления влажных препаратов можно использовать внутренние органы животных и птиц, которых используют в пищу жители села. Кроме того школьники иногда приносят учителю биологии погибших животных – рыб, земноводных, пресмыкающихся и т.д., которых также можно использовать для этих целей.
Мы хотели бы поделиться опытом изготовления влажных демонстрационных препаратов в условиях школьного кабинета биологии. Основные правила изготовления влажных демонстрационных препаратов сводятся к следующим.
1. При изготовлении препаратов необходимо работать в анатомических резиновых перчатках.
2. Материал для препаратов надо брать от недавно погибших, но не больных инфекционными заболеваниями животных.
3. Для быстрого проникновения фиксирующей жидкости можно сделать надрезы на тыльной стороне крупного органа.
4. Нельзя допускать загрязнения препарата содержимым кишечника, желудка и кровью.
5. Объем фиксирующей жидкости должен быть в 10 раз больше объема фиксируемого материала.
6. Полостные органы (мочевой или желчный пузырь, кишечник) после удаления содержимого заполняют ватой.
7. Для демонстрации слизистой оболочки соответствующий орган выворачивают наизнанку.
8. Фиксирующую жидкость внутрь органа или ткани вводят при помощи шприца, прокалывая орган в разных местах или через естественные ходы: бронхи, кровеносные сосуды и т.д.
9. Продолжительность фиксации материала – до 7 суток.
После окончания фиксации препарат переносят в специальную стеклянную посуду, заполненную жидкостью для хранения. Если такой посуды нет, можно использовать обычные банки емкостью 0,5–2,0 л, которые закрывают металлическими крышками с помощью закаточной машинки (у нас такие препараты хранятся уже около 6 лет).
Чаще всего для фиксации используют 10%-ный раствор формалина, для получения которого смешивают 300 мл кипяченой воды и 100 мл 40%-ного формалина.
Для фиксации лучше использовать нейтральный формалин, который готовят следующим образом.
К 1 л имеющегося в продаже 40%-ного раствора формалина добавляют 100 г молотого мела или углекислой магнезии. Полученный раствор несколько раз в течение дня перемешивают, а затем отстаивают, после чего с помощью 0,1 Н HCl или 0,1 Н NaOH доводят значение pH раствора формалина до 7,0.
Если препараты хранятся в плохо отапливаемых помещениях, то фиксировать и хранить их можно в жидкости, приготовленной по рецептуре, предложенной Г.Рожковым и В.Бажановым: 1,5 мл 40%-ного формалина добавляют к раствору, содержащему 25 г поваренной соли в 85 мл кипяченой воды. По словам авторов этот раствор не замерзает при температуре до –28 °С.
Для изготовления препаратов с сохранением естественной окраски органов можно использовать метод Иоресса.
Жидкость для фиксации препаратов с сохранением цвета (продолжительность фиксации 3–5 суток):
– вода водопроводная – 1000 мл
– карловарская соль (22 г Na2SO4, 18 г NaHCO3, 9 г NaCl, 1 г K2SO4) – 50 г
– насыщенный раствор хлоральгидрата на дистиллированной или дважды прокипяченной и отстоянной воде – 50 мл;
– 40%-ный формалин – 50–100 мл.
Жидкость для хранения препарата с сохранением цвета:
– вода водопроводная – 1000 мл;
– ацетат калия или натрия – 300 г;
– глицерин – 600 мл.
Для хранения препарата можно также использовать жидкость Тизенгаузена:
– вода водопроводная – 1000 мл;
– натрия хлорид – 200 г;
– калийная селитра (KNO3) – 10 г.
Источник
Влажные препараты по биологии своими руками
ИЗГОТОВЛЕНИЕ ВЛАЖНЫХ ПРЕПАРАТОВ
Наиболее распространен метод сохранения органов и отдельных тканей (частей) трупа животного во влажной среде (жидкости), как более надежный для сохранения естественной окраски.
Изготовление влажных патологоанатомических препаратов слагается из ряда этапов: отбор материала и подготовка его к фиксации; фиксация; восстановление цвета; консервирование (пропитывание глицериновой смесью); монтирование препарата.
Для фиксации, восстановления цвета и консервирования патологоанатомического материала предложено несколько прописей растворов. Из них наибольшее практическое значение имеют следующие.
Формалин представляет собой 40%-ный водный раствор формальдегида (СН20). Это бесцветная или слегка желтоватая жидкость с резким запахом. Хорошо растворима в воде. Обладает сильным бактерицидным действием. Впервые в патологоанатомической практике применен в 1893 г., с тех пор благодаря доступности, дешевизне и способности надежно предохранять органы и ткани от гниения стал одним из наиболее употребительных фиксаторов.
Растворы формалина легко испаряются, и его пары вызывают раздражение слизистых оболочке, что вызывает слезотечение, кашель, чихание (опасен для верхних дыхательных путей). При работе (с патматериалом, фиксированным в формалине) без перчаток происходит дубление и сморщивание кожи рук. Действие его на ткани вызывает необратимый процесс. Хранение формалина на свету, а также в холодном помещении приводит к полимеризации его, образуется параформальдегид (параформ), который выпадает на дно сосуда (бутыли) в виде плотного белого осадка или хлопьев, которые плавают в жидкости и придают ей цвет молока.
Для растворения осадка (или восстановления) формалин нагревают до 80—85 °С со щелочами. На 100 мл такого формалина (с осадком) берут 130 мл воды и 20 мл нормального раствора едкого кали (56 г КОН на 1 л воды). В результате формалин становится прозрачным. Иногда для просветления формалина бывает достаточно лишь подогреть его. Подогревают формалин в вытяжном шкафу или на открытом воздухе.
Действие формалина на ткани зависит от концентрации его и продолжительности фиксации. Если растворы концентрированные, быстро образуется поверхностный слой коагулированного белка и фиксация замедляется, слабые растворы легче проникают в ткань, но действуют медленнее.
Лучшими фиксирующими свойствами обладает 10%-ный раствор нейтрального формалина.
Последовательность изготовления патологоанатомических препаратов. Отбор материала и подготовка его к фиксации. Для приготовления препарата берут такие участки органов и тканей, которые содержат не только пораженные, но и здоровые ткани (для сравнения). Материал для приготовления препаратов берут вскоре после гибели или убоя животного, так как чем дольше лежит труп, тем хуже сохраняется картина патологического процесса (особенно быстро изменяется цвет тканей), тем труднее восстановить естественный цвет тканей.
Вначале проводят предварительную обработку. Она заключается в том, чтобы удалить все ненужные для демонстрации того или иного процесса ткани. Различные загрязнения, обрывки тканей, сгустки крови удаляют до фиксации, поскольку после нее придать соответствующую форму препарату или снять загрязнение и кровь практически невозможно, не нарушая его внешнего вида. Иногда препарат на несколько часов (4—8) помещают в фиксирующую жидкость, а затем проводят его соответствующую обработку: снимают загрязнения, срезают обрывки тканей, удаляют жир и др.
Толщина препарата не должна превышать 3—4 см, так как фиксирующая жидкость медленно проникает в глубь тканей. Если препараты по какой-либо причине нельзя сделать требуемой толщины, то до погружения их в жидкость делают (острым ножом с противоположной для показа стороны) надрезы, в которые кладут гигроскопическую вату, смоченную фиксирующей жидкостью. Фиксирующую жидкость в толщу препарата можно вводить шприцем, прокалывая его во многих местах. Если фиксируют целиком орган или труп мелкого животного, фиксирующую жидкость вводят в крупные кровеносные сосуды или другие естественные каналы под давлением. Кроме того, удаляют внутренние органы через разрез брюшной стенки; последнюю аккуратно зашивают (или кишечник удаляют через тазовую полость и прямую кишку).
Ткани, обладающие способностью быстро сморщиваться, перед фиксацией растягивают на каком-либо твердом предмете (на пробковой пластинке, картоне, тонкой доске) и вместе с ним помещают в фиксирующую жидкость. Отрезки кишечника (слизистой оболочкой вверх) также фиксируют, укрепив на кусочке картона или пробковой пластинке. В тех случаях, когда нужно сохранить целостность и толщину полостного органа, фиксирующую жидкость наливают в его полость, а затем заполняют гигроскопической ватой или выворачивают (если есть показания) слизистой оболочкой наружу, а полость заполняют гигроскопической ватой или другим гигроскопическим материалом (хлопчатобумажной материей), придав ему соответствующий внешний вид. Плотные трубчатые органы (трахея, бронхи, гортань) фиксируют в раскрытом состоянии. Для этого вставляют распорки (стеклянные трубочки или деревянные палочки) в местах их разреза или разъединения. Распорки вставляют так, чтобы они не заслоняли измененных участков. Под сердечные клапаны (митральный, трехстворчатый и полулунные в аорте и легочной артерии) кладут кусочки гигроскопической ваты, смоченной фиксирующей жидкостью.
Фиксирование. Подготовленный препарат фиксируют. Для этого на дно посуды (избегать металлической!), в которой будет фиксироваться препарат, кладут слой гигроскопической ваты, смоченной фиксирующей жидкостью. На нее помещают препарат, придают ему соответствующую форму и заливают жидкостью. Лучшими считают жидкости Кайзерлинга и Мельникова-Разведенкова (раствор I). Если одновременно фиксируют несколько препаратов, то каждый из них аккуратно прокладывают ватой (также смоченной фиксирующей жидкостью). Это делают для того, чтобы препараты не деформировались.
Объем фиксирующей жидкости должен в несколько раз превышать объем фиксируемого материала. Продолжительность фиксации зависит от размеров органа или ткани и определяется опытным путем. Стенки полостных органов (желудок, кишечник, мочевой пузырь и др.) фиксируют 1—2 сут, паренхиматозные органы (сердце, селезенка, почки, легкие и др.) — 1—2 нед и дольше.
Критерием того, что материал профилировался, является его уплотнение, равномерное окрашивание с поверхности и на разрезе в грязно-серый или буроватый цвет. Передерживать препараты в фиксирующей жидкости не рекомендуется, так как формалин разрушает гемоглобин и способность органа восстанавливать естественную окраску утрачивается. ?
Восстановление цвета препарата. Профилированный материал переносят в этиловый спирт концентрацией не ниже 80—90 % (спирт-сырец непригоден). Небольшие органы или ткани (или кусочки крупных органов) полностью погружают в спирт, крупные органы, чтобы не расходовать много спирта, обкладывают ватой, обильно смоченной спиртом. Посуду, в которой восстанавливают препарат, плотно закрывают.
В 1895 г. Н. Ф. Мельников-Разведенков установил, что метгемоглобин, образующийся при фиксации препарата и придающий органу или ткани грязно-серый цвет, переводится спиртом в стойкий катгемоглобин (нейтральный гематин), имеющий цвет оксигемоглобина и восстанавливающий естественную окраску органа или ткани.
Иногда естественный цвет восстанавливается очень быстро, в течение нескольких минут. Однако, чтобы спирт проник глубже в ткани, препарат выдерживают в спирте в течение 12 ч. Можно вначале погрузить препарат в спирт, уже бывший в употреблении, а затем на 1—2 ч в свежий. Если препарат достаточно полно восстановил естественный цвет, процесс нужно приостановить. При передержке в спирте препарат обесцвечивается.
В литературе есть прописи, в которых спирт не является необходимой составной частью для восстановления цвета. Естественная окраска органа или ткани сохраняется, если к раствору I прибавить хлоралгидрат. Пример такой прописи:
Однако эта смесь (пропись) менее эффективна по сравнению с прописями, содержащими спирт, и используется значительно реже.
Консервирование (пропитывание препаратов глицериновой смесью). После восстановления цвета органы или ткани переносят в раствор III для консервирования и длительного хранения.
Препарат опускают в стеклянную банку со смесью и, чтобы он не всплывал, покрывают ватой или тканью. Через 2—3 нед препарат опускается на дно. Хранят препараты в этих же смесях. При длительном хранении препаратов глицериновая смесь мутнеет в результате перехода красящих веществ из ткани в глицерин и может выпадать осадок. Причинами этого могут быть плохая первичная фиксация, несоблюдение сроков фиксации, объемных пропорций, содержание в препарате повышенного количества пигмента, неправильное хранение (перепад температур) и др. В таких случаях препарат заделывают заново. Для удаления осадков и пигмента его промывают в воде и на 30—60 мин помещают в жидкость следующего состава: 1000 мл воды, 30 мл концентрированной химически чистой соляной кислоты и 10 мл азотной кислоты. Затем такое же время промывают в воде, выдерживают в 0,5%-ном растворе хлорамина, переносят в 2%-ный раствор хлорной извести, опять промывают водой (желательно проточной) и заливают свежей смесью глицерина.
Заключение препарата в стеклянную банку (подготовка посуды и монтаж влажных препаратов). Для хранения влажных патологоанатомических препаратов чаще используют прямоугольные стеклянные банки. Можно употреблять и цилиндрические сосуды, редко — банки домашнего обихода (консервная посуда). Посуда, в которой делают препараты для музея, должна быть прозрачной, не искажать цвет и форму препарата и герметически закрываться крышкой. Банки для хранения препаратов готовят заранее. Их тщательно моют при помощи щетки водой с мылом. Подбирают к ним и также тщательно моют стеклянные крышки (их вырезают из стекла чуть больше периметра отверстия банки). Перед приклеиванием крышки края банки обезжиривают спиртом или авиационным бензином и обмазывают менделеевской замазкой (лучше окунуть края банки в расплавленную замазку). Затем в банку наливают немного глицериновой смеси (раствор III) и опускают смонтированный (на стеклянной пластинке или без нее) препарат. Стеклянную пластинку обычно вырезают по ширине банки, а препарат к ней прикрепляют белыми нитками вплотную. Заливают препарат смесью, не доводя до краев на 3—4 см. Туда же опускают кусок ватмана или другой плотной белой бумаги, на которой тушью или графитным карандашом написан код препарата. В книге записей под этим номером-шифром обозначают все данные о препарате: откуда он поступил, когда, вид животного, чем болело и др. Затем нагревают на пламени горелки^спиртовой или газовой) крышку и кладут ее на ребра банки, на которой предварительно была нанесена менделеевская замазка. Последняя плавится, и крышка плотно прилегает к банке. Можно крышку не нагревать, а поставить на нее горячий тяжелый предмет (например, утюг). Когда крышка остынет и замазка затвердеет, края крышки еще раз обмазывают менделеевской замазкой и покрывают черной эмалью или черным лаком. В верхнем углу банки обычно наклеивают этикетку с указанием органа и патологоанатомического процесса. В состав менделеевской замазки входят:
Готовят ее следующим обратом. Сначала в водяной бане расплавляют пчелиный воск, затем добавляют канифоль, массу перемешивают, добавляют мумию (охру), размешивают и добавляют масло. Смесь варят до прекращения пенообразования (примерно 2 ч).
Музейную посуду приобретают по линии Зооветснаба или в зоомагазинах. Если специальной посуды нет, ее можно приготовить из органического стекла. Техника изготовления описана в соответствующих руководствах.
Источник